上海古朵生物詳細講述雞腫瘤壞死因子β（TNF-β）ELISA檢測試劑盒組成，操作步驟及其他咨訊，本司提供ELISA試劑盒免費代測服務，一周內出結果，ELISA種屬有：大鼠ELISA檢測試劑盒，小鼠ELISA檢測試劑盒，人ELISA試劑盒，馬ELISA檢測試劑盒，羊ELISA檢測試劑盒，猴ELISA試劑盒，豬ELISA試劑盒，狗ELISA檢測試劑盒，

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雞腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA檢測試劑盒說明書

　　【信息說明】

　　中文名：雞腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒

　　別名：雞腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA Kit

　　供應商：上海古朵

　　規格：48t/96t

　　保存：2-8℃

　　保質期：6個月

　　用途：主要用于科研方面，不用于臨床診斷。可以用于檢測各種指標。

　　試劑盒成分：酶標板，試劑，標準品等。

　　種屬：人、大小鼠、豚鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊、植物等。

　　【組成說明】

　　1、450±10nm濾光片的酶標儀(建議儀器使用前提前預熱)

　　2、單道或多道微量加液器及吸頭

　　3、稀釋樣品的EP管

　　4、蒸餾水或去離子水

　　5、吸水紙

　　6、盛放洗液的容器

　　【樣本要求】

　　1、血清：

　　室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

　　2、血漿：

　　應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成應再次離心。

　　3、尿液：

　　用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

　　4、細胞培養上清：

　　檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。

　　5、培養細胞:

　　檢測細胞內的成份時，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

　　6、組織標本:

　　切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

　　7、標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

　　8、不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

　　【操作步驟】

　　1、標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，依次進行稀釋數倍。

　　2、加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

　　3、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

　　4、配液：將30倍(48T 的20 倍)濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

　　5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

　　6、加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

　　7、溫育：操作同3。

　　8、洗滌：操作同5。

　　9、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.

　　10、終止：每孔加終止液50μl，終止反應(此時藍色立轉黃色)。

　　11、測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

　　【注意事項】

　　1、試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

　　2、濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

　　3、各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，*使用排槍加樣。

　　4、請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔一孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

　　5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6、底物請避光保存。

　　7、嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

　　8、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

　　9、本試劑不同批號組分不得混用。

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