1.細胞培養過程中的應用
細胞培養的一般過程主要包括四個步驟:準備、材料提取、培養和冷凍恢復。為了儲存細胞,特別是不易獲得的突變細胞或細胞株,冷凍細胞。冷凍溫度一般為196℃液氮溫度,細胞收集到冷凍儲存管中,加入含有保護劑(一般為二甲基亞砜或甘油)的培養液,以一定的冷卻速度冷凍,最后儲存在液氮中。在極低的溫度下,細胞的保存時間幾乎是無限的。
二、胚胎冷凍儲存技術
胚胎冷凍儲存技術是指在低溫環境下使用低溫保護劑儲存胚胎的技術。該技術是由20世紀下半葉人工授精技術的廣泛應用引起的。動物胚胎的冷凍保存原理是低溫降低了胚胎中的變質反應速度,溫度越小,胚胎保存時間越長。
目前已開發出慢速冷凍法、快速冷凍法、一步冷凍法、直接移植冷凍法、玻璃化冷凍法等多種胚胎冷凍保存方法。玻璃化冷凍法的步驟如下:
①將胚胎在室溫下發人25%玻璃化溶液(VS液)中預處理15分鐘。
②將預處理后的胚胎存放在高濃度(75%190%)的VS液中20-40分鐘。
③將經過兩步抗凍劑處理的胚胎直接儲存在液氮中。
此外,還可以用液氮罐儲存菌種、疫苗、骨組織、精子等成分,可以達到很好的長期儲存效果。
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