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氧化磷酸化系列/三磷酸腺苷測試盒/微量法
產品規格 :100管/48樣
測試方法：微量法
產品分類：氧化磷酸化系列
產品品牌：mlBio/酶聯生物
產品包裝：液體盒裝
運輸條件：快遞包郵
應用范圍：僅供科研研究使用
保存條件：低溫避光保存
有效期：６個月
說明書 : 咨詢或電詢客服索取
供應商：上海酶聯生物科技有限公司
注 意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
氧化磷酸化系列/三磷酸腺苷測試盒/微量法
測定意義：
線粒體復合體Ⅴ又稱F1F0-ATP合酶，廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體中，由F1和F0兩個亞單位組成。該酶利用呼吸鏈產生的質子電化學梯度催化ATP合成，也可逆過程水解ATP。此外，復合體Ⅴ還存在于葉綠體、異養菌和光合細菌中。復合體Ⅴ是線粒體氧化磷酸化和葉綠體光合磷酸化合成ATP的關鍵酶。
測定原理：
復合體Ⅴ水解ATP產生ADP和Pi，通過測定Pi增加速率來測定復合體Ⅴ活性。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣本的前處理：
組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
①準確稱取0.1g組織或收集500萬細胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
②將勻漿600g，4℃離心5min。
③棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。
④上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白，可用于測定從線粒體泄漏的復合體Ⅴ（此步可選做）。
⑤步驟④中的沉淀即為線粒體，加入800uL試劑二和8uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10秒，重復30次），用于復合體Ⅴ酶活性測定。
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