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氧化磷酸化系列/轉(zhuǎn)氫酶-1測(cè)試盒(微量法)

產(chǎn)品規(guī)格 : 100管/96樣

測(cè)試方法：微量法

產(chǎn)品分類(lèi)：氧化磷酸化系列

產(chǎn)品品牌：mlBio/酶聯(lián)生物

產(chǎn)品包裝：液體盒裝

運(yùn)輸條件：快遞包郵

應(yīng)用范圍：僅供科研研究使用

保存條件：低溫避光保存

有效期：６個(gè)月

說(shuō)明書(shū) : 咨詢(xún)或電詢(xún)客服索取

供應(yīng)商：上海酶聯(lián)生物科技有限公司

注    意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

氧化磷酸化系列/轉(zhuǎn)氫酶-1測(cè)試盒(微量法)

測(cè)定意義：
TH位于線(xiàn)粒體的內(nèi)膜上，又稱(chēng)為呼吸電子傳遞鏈復(fù)合體六，催化NADH+NADP+和 NAD++NADPH相互轉(zhuǎn)化。催化正向反應(yīng)稱(chēng)為T(mén)H-1。線(xiàn)粒體NADH含量增加時(shí)會(huì)導(dǎo)致線(xiàn)粒體膜的H+電化學(xué)梯度升高，因而促進(jìn)了電子傳遞鏈上ROS的產(chǎn)生。TH-1促進(jìn)NADH轉(zhuǎn)換為NADPH，從而提高線(xiàn)粒體的抗氧化能力。
測(cè)定原理：
NADH和NADPH均在340nm有特征吸收，因此TH催化的轉(zhuǎn)氫反應(yīng)不能導(dǎo)致340nm吸光度發(fā)生變化。用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸磷酸（APADP+）替代NADP+，TH-1催化 APADP+還原生成的APADPH在375nm有特征光吸收，因此通過(guò)測(cè)定375nm光吸收增加速率，來(lái)計(jì)算TH-1活性。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣本的前處理：
組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線(xiàn)粒體蛋白的分離：
①準(zhǔn)確稱(chēng)取0.1g組織或收集500萬(wàn)細(xì)胞，加入1mL試劑一，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
②將勻漿600g，4℃離心5min。
③棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11100g，4℃離心10min。
④上清液即為除去線(xiàn)粒體的胞漿蛋白，可用于測(cè)定從線(xiàn)粒體泄漏的TH-1（此步可選做）。
⑤步驟④中的沉淀即為線(xiàn)粒體，加入500uL試劑二，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10秒，重復(fù)30次），用于TH-1活性測(cè)定。